Entwicklung einer 2D-HPLC/MS-Analyse von Peptiden

Kurzbezeichnung

Proteinanalyse in biologischem Material gehört zu den z.Zt. anspruchsvollsten Themen in der biochemischen Analyse.

Laufzeit

01/2011 - 12/2013

Projektverantwortlich

Projektmittel

Forschungsinitiative

Kategorie

Proteinanalytik

Kurzbeschreibung des Projekts

Proteinanalyse in biologischem Material gehört zu den z.Zt. anspruchsvollsten Themen in der biochemischen Analyse. Die Quantifizierung definierter Proteine soll nach Spaltung in Peptide (Proteolyse) und Nachweis resultierender Signatur-Peptide nach chromatographischer Trennung (HPLC) und massenspektrometrischer Detektion (MS) erfolgen.
Für eine Quantifizierung kleinster Proteinkonzentrationen müssen alle Schritte der Proteolyse hinsichtlich Wiederfindung und Reproduzierbarkeit optimiert werden. Auf Grund der großen Peptidzahl einer komplexen Proteinmischung ist mit einer einfachen Chromatographie in den meisten Fällen keine vollständige Trennung zu erreichen. Hier soll eine 2D-Trennung versucht werden. Dabei sollen die unterschiedlichen Trennprinzipien der Ionenaustausch- und Umkehrphasen-Chromatographie online gekoppelt eingesetzt werden. Der Einsatz von Proteolyse und online 2D-Trennung soll mit definierten Proteinen validiert und die Leistungsfähigkeit und Grenzen aufgezeigt werden.